紫外可见分光光度计的结构
根据光度学分类,
紫外可见分光光度计可分为单光束和双光束分光光度计,根据测量中提供的波长数可分为单波长分光光度计和双波长分光光度计
单波长单光束分光光度计
这类分光光度计有直读式和调零式(电位补偿式)两种,单光束直读式仪器是最简单的分光光度计型式,国内普遍使用的721型和722型分光光度计就是属于这种类型的仪器,其波长范围是360-800nm,这两种仪器的区别是721型是棱镜分光,表头直读,而722型是光栅分光,数字显示。
721型分光光度计的光学系统
由光源灯1发出的连续辐射光谱射到聚光透镜上,会聚后再经平面反射镜转角90℃反射至入光狭缝,由此入射到单色器内,狭缝正好位于球面准直镜的焦平面上,入射光经准直镜反射后,以一束平行光射向色散棱镜,产生色散,光线入射角位于最小偏向角,入射光在铝面上沿原路反射回来,再经过准直镜反射,会聚在出光狭缝上,由狭缝射出的一定波长的单色光经过光栏聚光于透镜和吸收池,照射到光闸上,当光门打开时,通过保护玻璃射到光电管上,光电管产生的光电流经过放大器放大后,由薇安表指示出来。
单波长双光束分光光度计
一般的单光束分光光度计每换一个波长都必须用空白进行校准,测定吸收光谱较麻烦,且对光源和检测系统的稳定性要求较高,双光束分光光度计能自动比较透过空白和试样的光束强度,此比值即为试样的透射比。
来自光源的光束经单色器后,分离出的单色光经反射镜分解为强度相等的两束光,分别通过样品池和参比池,在平面反射镜的作用下汇合,投射到光电倍增管上,调制器带动反射镜和同步旋转,两光束分别通过参比池和样品池,然后经反射镜交替投射到光电倍增管上,检测器在不同的瞬间接收,处理参比信号和试样信号,其信号差再通过对数转换成吸光度。
单波长双束分光光度计大多设计为自动记录式,能自动扫描吸收光谱,另外它还消除了电源电压波动的影响,减小了放大器增益的漂移。
双波长分光光度计
当试样溶液浑浊或背景吸收大或共存组合的吸收光谱相互重叠有干扰时,宜采用双波长分光光度法进行测定,双波长分光光度计的光路是从光源发出的光经过单色器后得到不同波长的两束单色光,利用切光器使两束光以一定的频率交替通过同一吸收池达到检测器,由测量系统显示出两个波长下吸光度的差值。双波长
分光光度计常采用等吸收点法和系数倍率法等进行有干扰组分存在时的定量分析。