反应条件的选择
显色反应能否满足分光光度法的要求，除了选择显色剂以外，控制好反应条件是十分重要的。
溶液酸度 溶液的酸度对光度测定有显著影响，它影响待测组分的吸收光谱、显色剂的形态、待测组分的化合状态及显色化合物的组成。酸度不同时，显色化合物的组成和颜色可能不同。溶液酸度变化，显色剂的颜色可能发生变化，原因是很多有机显色剂是酸碱指示剂，其颜色随着PH值变化而变化。溶液算顾过高会降低配合物的稳定性，特别是对弱酸型有机显色剂和金属离子形成的配合物影响较大。溶液酸度过低会引起金属离子水解生成氢氧化物沉淀，这种现象常发生在有色配合物的稳定度不是很大，并且被测金属离子所形成的氢氧化物的溶解度又很小的情况下。
由于酸度对显色反应的影响很大，因此某一显色反应最适宜的酸度必须通过实验来确定，其方法是通过实验做吸光度A-pH关系曲线，选择曲线平坦部分对应的PH值作为应该控制的酸度范围。
温度的影响
大多数的显色反应在室温下即可进行，有些显色反应需加热至一定的温度才能完成，而有些有色配合物在较高的温度下容易分解，因此对不同的显色反应应通过实验选择其适宜的显色温度。由于温度对光的吸收及颜色的深浅都有影响，因此在绘制标准曲线和进行样品测定时，应使温度保持一致
显色时间
所谓显色时间指的是溶液颜色达到稳定时的时间，不少显色反应需要一定时间才能完成，而且形成的有色配合物的稳定性也不一样，因此必须在显色后一定的时间内进行比色测定，通常有以下几种情况：1、加入显色剂后，有色配合物立即生成，并且生成的有色配合物很稳定，此时可在显色后较长时间内进行测定。2、加入显色剂后，有色配合物的形成需要一定时间，但生成的有色配合物也很稳定，对这类反应可在完全显色后放置一些时间内进行测定。3、加入显色剂后，有色溶液即可生成，但在放置后又逐渐褪色，对这类反应，应在显色后立即进行测定。
适宜的显色时间和有色溶液的稳定程度可以通过实验来确定，方法是配置一份显色溶液，从加入显色剂起计算时间，每隔几分钟、几十分钟或数小时测定一次吸光度，绘制吸光度曲线，从曲线确定适宜的显色时间。
溶剂
有机溶剂降低有色化合物的离解度，从而提高显色反应的灵敏度，此外，有机溶剂还可能提高显色反应的速度，影响有色配合物的溶解度和组成等，利用有色化合物在有机溶剂中稳定性好，溶解度大的特点，可以选择合适的有机溶剂，采用萃取光度法来提高方法的灵敏度和选择性。
