为保证测试结果的准确可靠，新制造、使用中和修理后的
分光光度计都应定期进行检定，国家技术监督局批准颁布了各类紫外、可见及近红外分光光度计的检定规程。
检定规程规定了检定周期，如单光束紫外可见分光光度计的检定周期为1年，在此期间内，仪器经修理或对测量结果由怀疑时，应及时进行检定。
1、稳定度
在单光束紫外可见分光光度计接受元件不受光情况下，调整仪器零点，使显示值为0%，观察3min，记录透射比示值最大变化即为暗电流稳定度；在仪器接受元件受光情况下，于仪器波长范围两端内缩10nm处，调整透射比100%，观察三分钟，记录透射比示值最大变化即为光电流稳定度。
波长准确度
波长准确度是指单色光最大强度的波长值与波长指示值之差，可以用汞灯较强光谱线或氢灯来检验。在紫外光区检验波长准确度比较实用的方法是用苯蒸气的吸收光谱曲线来检查，苯蒸气在紫外光区的特征吸收峰是利用这些吸收峰所对应波长来检查单光束紫外可见分光光度计波长准确度非常方便，具体做法是，在吸收池滴一滴液体苯，盖上吸收池盖，待苯挥发充满整个吸收池后，绘制苯蒸气的吸收光谱，如果测定的波长误差超出规定，可按单光束紫外可见分光光度计说明书进行调整。
3、透射比准确度
透射比准确度的检定方法有中性玻璃滤光片法（可见光区）和标准溶液法
4、基线平直度
单光束
紫外可见分光光度计波长置于起始位置，带宽2nm，吸光度量程为±0.01，样品和参比皆为空白，进行全波段扫描，测量图谱中起始点与最大偏移量之差（允许记录笔在更换光源或滤光片时有瞬间跳动）
5、吸收池配套性
在同一光径的石英洗手池中装蒸馏水在220nm700nm处测定，玻璃吸收池装30mg/l的重铬酸钾溶液，在440nm处测定，装蒸馏水700nm处测定，将一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值。在实际工作中，可采用如下校准单光束紫外可见分光光度计方法，在测定波长下，将吸收池磨砂面用铅笔编号，于干净的吸收池中装入测定用溶剂，以其中一个为参比，测定其他吸收池的吸光度，若测定的吸光度为零或两个吸收池的吸光度相等，即为配对吸收池，若不能配对，可选出吸光度最小的吸收池为参比，测定其它吸收池的吸光度，求出修正值。测定样品时，将待测溶液装入校准过的吸收池中，将测得的吸光度值减去该吸收池的修正值即为测定的真实值。
