高效液相色谱法和液相色谱仪使用中的注意事项
高效液相色谱法是以液体为流动相，采用粒径很小和高效固定相的柱色谱分离技术，HPLC对样品的适应性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，弥补了气相色谱法的不足。除气体样品外，在目前已知的有机化合物中，适宜用气相色谱分析只占约20%，另80%则需用HPLC进行分析，特别适用于进行天然产物、生物大分子、高聚物及离子型化合物的分离和分析。
一、液相色谱的主要类型及基本原理
高效色谱法和气相色谱法的基本理论比较相似，主要区别在于作为流动相的液体与气体性质间的差别，液相色谱法根据固定相的性质可分为吸附色谱法 、键合色谱法、离子交换色谱法和空间排阻色谱法。
1、吸附色谱法
固定相为硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等吸附剂。流动相为非水有机溶剂。不同组分分子和流动相分子对吸附剂表面的活性中心进行竞争吸附，这种竞争能力的大小决定了保留值的大小，被活性中心吸附的越牢的组分保留值越大
2、键合相色谱法
利用化学反应通过共价键将有机分子键合在载体表面，形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相，采用极性键合固定相、非极性流动相的称为正相色谱，采用非极性键合固定相、极性流动相的称为反相色谱，组分保留值的大小主要取决于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。
二、高效液相色谱仪及其使用中的注意事项
高效液相色谱仪
1、流动相。在液相色谱分析中，流动相也具有选择性分离的作用，因此在确定了用于分离的固定相后，可以通过改变流动相的组成达到优化分离的目的。储液器用来存放流动相，流动相从高压的色谱柱内流出时，会释放其中溶解的气体，这些气体进入检测器后会使噪声剧增，因此流动相在使用前必须经过脱气处理。常用脱气方法有减压法、超声法和惰性气体置换法，一些液相色谱仪带有在线脱气装置，在线脱气装置使流动相通过真空烘箱中的多孔塑料膜管路，管外的负压使溶剂中溶解的气体渗过塑料膜进入真空烘箱，达到脱气的目的，惰性气体置换法使用在溶剂中溶解度极小的惰性气体，如氦，向流动相溶液中吹扫，置换溶解的气体。
2、输液系统
液相色谱仪输液系统通常由输液泵、单向阀、流量控制器、混合器、脉动缓冲器、压力传感器等部件组成，由于流速的准确性和稳定性决定了分析的重现性，因此要求高压输液泵能够实现准确、稳定、无脉动的液体输送。
输液泵分为单柱塞往复泵和双柱塞往复泵，由于固定相颗粒极细，输送也动相时色谱柱的阻力很大，泵的输液压力最高可达40MPa。单向阀装在泵头上部，在泵的洗液冲程中用来关闭出液液路。流量控制器可使流量保持恒定，确保流量不受色谱柱反压影响。浑噩后期由接头和空管组成，使溶剂经混合器完全混合均匀。脉动缓冲器的作用是将压力与流量的脉动除去，使到达色谱柱的液流为无脉冲液流，压力传感器用压敏半导体元件测量柱头压力并显示。为了改进分离效果，往往采用多元溶剂实现梯度淋洗。
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