紫外可见分光光度计的应用
紫外可见分光光度计在药学领域的应用十分广泛,许多药物分子中都包含能够产生紫外吸收的基团,具体说来主要分为定性分析和定量分析两个方面。
1、定性分析
在定性方面,紫外可见分光光度计可用于化合物的结构分析和化合物的鉴定
结构分析:紫外可见分光光度计用于结构分析比较有限,只能分析含有π轨道的结构,其理论依据为:不同基团发生吸收时的特征是相异的;同一基团与相邻基团发生共轭后,吸收特征也会发生变化,如乙烯和丁二烯在相同实验条件下最大吸收波长分别为165nm和217nm。
所以根据化合物吸收光谱可以推测其是否含有某种官能团,还可以推测与其相邻的官能团。例如某种化合物在200-800nm范围内无吸收峰,则该化合物不含双键或环状共轭体系,如果其在250-300nm范围内有中强吸收且有一定的精细结构,则可能有苯环的结构,此外,紫外可见光谱法还可以研究化合物的互变异构体和顺反异构体。
化合物的鉴定:运用紫外可见光谱法可以为化合物的鉴定提供一些信息,如果两种化合物的紫外可见光谱图在同样的实验条件下完全相同,则存在两者为同一化合物的可能性。但是由于该方法只能鉴定吸收基团而无法鉴定非吸收基团,一些吸收基团的吸收峰不受其他非吸收基团的影响,图谱中只有少数几个波长范围宽而缺少特征的峰,因此只利用紫外可见光谱法很难得到可靠的结论,往往需要配合核磁共振光谱、质谱、红外光谱等其他方法进行定性鉴定。
2、定量分析
紫外可见光谱法是定量分析中最常用的方法之一,具有应用范围广、选择性好等优点,这种方法既能进行单组分的定量,又能进行多组分的定量。紫外可见光谱法进行定量分析的理论根据为朗伯比尔定律。
实验注意事项
应用紫外分光光度计时要注意以下事项:
1、进行实验前、要先根据具体的实验设计选择合适的紫外可见分光光度计类型,根据样品的量选择合适的样品池,量少的样品使用微量样品池
2、选择溶剂时,既要选用有很好的溶解能力的溶剂,还要尽量选用与样品作用较小的溶剂,防止图谱中震动精细结构消失
3、使用分光光度计时要保证样品室绝对干净,小心放入样品,放入比色皿前一定要先用滤纸和擦镜纸将比色皿外表面擦干净,不要污染样品池和光度计外表面。
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